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玉米赤霉烯酮样本前处理及测定方法

文章类别:知识百科| 发布日期:2013.10.22

玉米赤霉烯酮样本处理前须知:

处理任何样本时,都须注意:

(1)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。

(2)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必须使用洁净实验器具,以避免污染干扰实验结果。

玉米赤霉烯酮样本前处理及测定方法

样本前处理步骤:

饲料处理方法:

1、取5g 粉碎样品,加入50 mL 样品提取液;

2、剧烈振荡10 min;

3、4000 r/min 离心5 min,或用普通滤纸过滤;

4、将上清液或滤液用样品稀释液按1:19 体积比进行稀释并充分混匀(1 份上清液或滤液+19 份样品稀释液);

5、取稀释后液体待测。

测定步骤:

1、将所需试剂和微孔板从冷藏环境中取出,在室温下平衡30 min,每种液体使用前均须摇匀。注意标准液均需做2 个平行试验。

2、加标准品:加入标准品/样品50 μL/孔,再加酶标记物50 μL/孔,最后加入抗体工作液μL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖好,室温25 ℃下避光反应30 min。

3、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,加洗涤液300 μL/孔,每次浸泡15~30 s,充分洗涤4~5 次,用吸水纸拍干。

4、显色:每孔先各加入底物液A 50 μL,再各加入底物液B 50 μL,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖好,室温25 ℃下避光反应15 min。

5、测定:每孔各加50 μL 终止液,设定酶标仪在450 nm 处,测定OD 值(建议用450/630 nm 双波长检测,在5 min 内读完数据)。




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